Anti-ge porcine pseudorabies ιών ιού ELISA κιτ

Προσδιορισμός

PRV-GE AB ELISA

Προβλεπόμενη χρήση: Ο μπλοκάρισμα του ιού pseudorabies του χοίρου

Το κιτ ανίχνευσης ELISA αντισώματος είναι για τον προσδιορισμό του αντισώματος GE στον ορό του χοίρου του ιού ψευδοαρελάκων χοίρου in vitro. Η δοκιμή χρησιμοποιείται για τη διάκριση μολυσμένων άγριων

Ο ιός και ο εμβολιασμός από ανοσοποίηση με εμβόλιο διαγραφής γονιδίου GE.

Δείγμα: ορός

Απαιτούνται υλικά αλλά δεν παρέχονται:

Καθαρισμένο νερό

Πιπέτης

96- Well MicroPlate Reader (450nm)

Μετρών την ώραν

Φυγόκεντρος (4000rpm)

Πλυντήριο

Φούρνος (37 μοίρες)

 

Διαδικασίες και ερμηνεία δοκιμών

Διαδικασία δοκιμής βήμα 1

1.1 ΠΡΟΣΑΡΤΗΜΑ ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΩΝ

Wσυγκέντρωση orking washing υγρό:Πριν από τη χρήση, το διάλυμα πλύσης πρέπει να αποκατασταθεί σε θερμοκρασία δωματίου (20-25 βαθμό) και να κλονιστεί ομοιόμορφα για να το κάνει ομοιόμορφη. Στη συνέχεια αραιώστε 20 φορές το συμπυκνωμένο διάλυμα πλύσης με καθαρισμένο νερό (για παράδειγμα, προστίθεται συμπυκνωμένο διάλυμα πλυσίματος 5ml σε καθαρισμένο νερό 95ml), ανακατεύουμε καλά και το αραιωμένο υγρό πλύσης μπορεί να αποθηκευτεί σε 2-8 βαθμό για 7 ημέρες.

1.2 Προετοιμασία δείγματος

① Το αίμα ολόκληρου των ζώων ελήφθη, φυγοκεντρήθηκε στις 4000rpm για 10 λεπτά και το υπερκείμενο συλλέχθηκε. Ο ορός μπορεί επίσης να πέσει φυσικά χωρίς αιμόλυση.

② αραιώστε το δείγμα ορού 1: 1 (προσθέστε το δείγμα 70UL ορού σε αραιωτικό δείγμα 70UL) και ανακατέψτε καλά.

Σημείωση: Οι αρνητικοί και θετικοί μάρτυρες δεν χρειάζεται να αραιωθούν.

1.3 Διαδικασία δοκιμής

① Παρέχετε το μικροπλάνο ετικέτας ενζύμου (σύμφωνα με τον αριθμό των δειγμάτων, μπορεί να αποσυναρμολογηθεί και να χρησιμοποιηθεί αρκετές φορές), προσθέστε 100UL του αραιωμένου ορού στο μικροπλικό της ετικέτας ενζύμου, ρυθμίστε δύο φρεάτια για αρνητικά και θετικά δείγματα και προσθέστε 100UL για αρνητικά για αρνητικά και θετικούς ελέγχους στην αντίδραση αντιστοίχως αντίστοιχα. Ανακινήστε απαλά το δείγμα στο φρεάτιο, χρησιμοποιώντας την μεμβράνη πλάκας σφράγισης για να καλύψετε την πλάκα και να επωφεληθείτε σε 37 μοίρες για 60 λεπτά.

Ανοίξτε την μεμβράνη πλάκας στεγανοποίησης, αποβάλλετε το διάλυμα στην πλάκα καλά, προσθέστε 300μL υγρού πλύσης συγκέντρωσης εργασίας σε κάθε φρεάτιο και στη συνέχεια απορρίψτε το υγρό στο πηγάδι. Επαναλάβετε τα παραπάνω βήματα 5 φορές και τελικά στεγνώστε σε καθαρό απορροφητικό χαρτί.

③add 100μL συζευγμένου ενζύμου σε κάθε πηγάδι, καλύψτε την πλάκα και επωάστε σε 37 βαθμούς για 30 λεπτά.

Ανοίξτε την μεμβράνη πλάκας στεγανοποίησης, απομακρύνετε το διάλυμα στην πλάκα καλά, προσθέστε 300μL υγρού πλύσης συγκέντρωσης εργασίας σε κάθε φρεάτιο και στη συνέχεια απορρίψτε το υγρό στο πηγάδι. Επαναλάβετε τα παραπάνω βήματα 5 φορές και τελικά στεγνώστε σε καθαρό απορροφητικό χαρτί.

⑤add διάλυμα υποστρώματος 100μL σε κάθε φρεάτιο, καλύψτε την πλάκα και επωάστε για 15 λεπτά σε 37 μοίρες μακριά από το φως.

⑥add 50μL Διακοπή διαλύματος σε κάθε φρεάτιο και καθορίστε το αποτέλεσμα εντός 5 λεπτών.

Βήμα 2 Ερμηνεία αποτελεσμάτων

Η τιμή OD450 κάθε φρεατίου διαβάστηκε στο 96- καλά microplate Reader.

2.1 επικύρωση

The average OD450nm value of negative control was ≥ 0.5 and the blocking rate of positive control was >50%, τα πειραματικά αποτελέσματα ήταν έγκυρα. Διαφορετικά, η δοκιμή πρέπει να επαναληφθεί.

2.2 Μέθοδος υπολογισμού

Για κάθε δείγμα, υπολογίστε το PI (BlockingR ATE) ως εξής χρησιμοποιώντας τις διορθωμένες τιμές δείγματος και ελέγχου:

2.3 Ερμηνεία αποτελεσμάτων

Όταν PI <40%, κρίνεται ως αρνητικό.

Όταν το PI> 50%, κρίνεται ως θετικό.

Όταν 40% μικρότερο ή ίσο με PI μικρότερο ή ίσο με 50%, κρίνεται ως ύποπτος και προτείνει να επαναλάβει τη δειγματοληψία και να δοκιμάσει μία εβδομάδα αργότερα.

Δημοφιλείς Ετικέτες: Anti-Ge Porcine Pseudorabies Virus ιού ELISA KIT, Κίνα αντι-GE Porcine Pseudorabies Virus ther ιού