Κιτ ELISA αντισώματος Brucella Antibody

Προσδιορισμός

 

Διαδικασίες και ερμηνεία δοκιμών

 

Διαδικασία δοκιμής βήμα 1

1.1 ΠΡΟΣΑΡΤΗΜΑ ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΩΝ

Wσυγκέντρωση orking washing υγρό:Πριν από τη χρήση, το διάλυμα πλύσης πρέπει να αποκατασταθεί σε θερμοκρασία δωματίου (20-25 βαθμό) και να κλονιστεί ομοιόμορφα για να το κάνει ομοιόμορφη. Στη συνέχεια αραιώστε 20 φορές το συμπυκνωμένο διάλυμα πλύσης με καθαρισμένο νερό (για παράδειγμα, προστίθεται συμπυκνωμένο διάλυμα πλυσίματος 5ml σε καθαρισμένο νερό 95ml), ανακατεύουμε καλά και το αραιωμένο υγρό πλύσης μπορεί να αποθηκευτεί σε 2-8 βαθμό για 7 ημέρες.

1.2 Προετοιμασία δείγματος

Το αίμα των ζώων ελήφθη, φυγοκεντρήθηκε στις 4000rpm για 10 λεπτά και το υπερκείμενο συλλέχθηκε. Ο ορός μπορεί επίσης να πέσει φυσικά χωρίς αιμόλυση.

Όταν το μέγεθος του δείγματος είναι μεγάλο, προκειμένου να διασφαλιστεί ότι ο πειραματικός χρόνος αντίδρασης είναι συνεπής. Ανακατέψτε το δείγμα ορού με το διάλυμα λειτουργίας αντισώματος στο 1: 1 στην πλάκα αραίωσης (δείγμα ορού 70UL + 70 ul ult -stiver working solution). Ο αρνητικός έλεγχος και ο θετικός έλεγχος είναι ο ίδιος με το δείγμα ορού.

1.3 Διαδικασία δοκιμής

① Παρέχετε το μικροπλάνο ετικέτας ενζύμου (σύμφωνα με τον αριθμό των δειγμάτων, μπορεί να αποσυναρμολογηθεί και να χρησιμοποιηθεί αρκετές φορές), ρυθμίστε δύο φρεάτια για αρνητικούς και θετικούς μάρτυρες, προσθέστε το 100UL του πριμματωμένου μείγματος στο μικροπλάστη ετικέτας ενζύμου. Ανακινήστε απαλά το δείγμα στο φρεάτιο, χρησιμοποιώντας την μεμβράνη πλάκας σφράγισης για να καλύψετε την πλάκα και να επωφεληθείτε σε 37 βαθμούς για 30 λεπτά.

Ανοίξτε την μεμβράνη πλάκας στεγανοποίησης, αποβάλλετε το διάλυμα στην πλάκα καλά, προσθέστε 300μL υγρού πλύσης συγκέντρωσης εργασίας σε κάθε φρεάτιο και στη συνέχεια απορρίψτε το υγρό στο πηγάδι. Επαναλάβετε τα παραπάνω βήματα 5 φορές και τελικά στεγνώστε σε καθαρό απορροφητικό χαρτί.

③Dσυζευγμένο ενζυμικό ενζυμικό:Αραιώστε το συζυγικό ένζυμο (50 ×) 50 φορές (για παράδειγμα: Συμπυκνωμένο συζευγμένο ενζυμικό ενζυμικό ενζυμικό {+ 980 ul diluent 1, η συγκεκριμένη ποσότητα υπολογίζεται ανάλογα με τον αριθμό των δειγμάτων δοκιμής), ανακατέψτε καλά και αφήστε την άκρη.

④add 100μL συζευγμένου ενζύμου σε κάθε πηγάδι, καλύψτε την πλάκα και επωάστε σε 37 βαθμούς για 30 λεπτά.

⑤ πλυντήριο πλυντήριο πλάκα, η συγκεκριμένη λειτουργία είναι η ίδια με την παραπάνω ②.

⑥add διάλυμα υποστρώματος 100μL σε κάθε φρεάτιο, καλύψτε την πλάκα και επωάστε για 10 λεπτά σε 37 μοίρες μακριά από το φως.

⑦add 50μL Διακοπή διαλύματος σε κάθε φρεάτιο και καθορίστε το αποτέλεσμα εντός 5 λεπτών.

 

Βήμα 2 Ερμηνεία αποτελεσμάτων

 

Η τιμή OD450 κάθε φρεατίου διαβάστηκε στο 96- καλά microplate Reader.

2.1 επικύρωση

 

Η μέση τιμή OD45 0 nm του θετικού ελέγχου ήταν <0,35 και η μέση τιμή OD450NM του αρνητικού ελέγχου/θετικού ελέγχου ήταν μεγαλύτερη ή ίση με 3,5, τα πειραματικά αποτελέσματα ήταν έγκυρα. Διαφορετικά, η δοκιμή πρέπει να επαναληφθεί.

2.2 Μέθοδος υπολογισμού

Για κάθε δείγμα, υπολογίστε το PI (BlockingR ATE) ως εξής χρησιμοποιώντας τις διορθωμένες τιμές δείγματος και ελέγχου:

2.3 Ερμηνεία αποτελεσμάτων

Όταν PI <20%, κρίνεται ως αρνητικό.

Όταν το PI> 30%, κρίνεται ως θετικό.

Όταν 20% μικρότερο ή ίσο με το PI μικρότερο ή ίσο με 30%, κρίνεται ως ύποπτος και προτείνει να επαναλάβει τη δειγματοληψία και να δοκιμάσει μία εβδομάδα αργότερα.

Δημοφιλείς Ετικέτες: BRUCELLA Αντισώματος ELISA KIT, Κίνα Brucella Αντισώματος Elisa Kit Προμηθευτές, Κατασκευαστές, Factory