Παρασκευή και απαιτήσεις αντιδραστηρίου κοτόπουλου Adrenomedullin (ADM)

1. Ορός: πήξη σε θερμοκρασία δωματίου για 10-20 λεπτά, φυγοκέντρηση για 20 λεπτά με ταχύτητα 2000-3000 σ.α.λ. Συλλέξτε το υπερκείμενο προσεκτικά και φυγοκεντρήστε ξανά εάν εμφανιστεί καθίζηση κατά την αποθήκευση.

2. Πλάσμα: Το EDTA ή το κιτρικό νάτριο θα πρέπει να επιλέγεται ως αντιπηκτικό σύμφωνα με τις απαιτήσεις του δείγματος. Μετά την ανάμιξη για 10-20 λεπτά, φυγοκεντρήστε για 20 λεπτά με ταχύτητα 2000-3000 σ.α.λ. Συλλέξτε το υπερκείμενο προσεκτικά και φυγοκεντρήστε ξανά εάν σχηματιστεί καθίζηση κατά την αποθήκευση.

3. ούρα: συλλέξτε με αποστειρωμένο σωλήνα, φυγοκεντρήστε για 20 λεπτά με ταχύτητα 2000-3000 σ.α.λ. Συλλέξτε το υπερκείμενο προσεκτικά και φυγοκεντρήστε ξανά εάν σχηματιστεί καθίζηση κατά την αποθήκευση. Θωρακικό και κοιλιακό υγρό, εφαρμογή αναφοράς εγκεφαλονωτιαίου υγρού.

4. Υπερκείμενο κυτταρικής καλλιέργειας: συλλέξτε με αποστειρωμένο σωλήνα κατά την ανίχνευση εξιδρωτικών συστατικών. Φυγοκεντρήστε για 20 λεπτά με ταχύτητα 2000-3000 σ.α.λ. Συλλέξτε προσεκτικά το υπερκείμενο. Κατά την ανίχνευση των συστατικών στα κύτταρα, το κυτταρικό εναιώρημα αραιώθηκε με PBS (ρΗ 7.2-7.4) και η συγκέντρωση των κυττάρων έφτασε περίπου το 1 εκατομμύριο / mL. Με επαναλαμβανόμενη κατάψυξη και απόψυξη, τα κύτταρα καταστρέφονται και τα ενδοκυτταρικά συστατικά απελευθερώνονται. Φυγοκεντρήστε για 20 λεπτά με ταχύτητα 2000-3000 σ.α.λ. Συλλέξτε προσεκτικά το υπερκείμενο. Εάν σχηματιστεί καθίζηση κατά τη συντήρηση, φυγοκεντρήστε ξανά.

5. Δείγμα ιστού: Αφού κόψετε το δείγμα, ζυγίστε το. Προσθέστε ένα συγκεκριμένο ποσό PBS, PH7.4. Ταχεία κρυοσυντήρηση σε υγρό άζωτο για μελλοντική χρήση. Το δείγμα παραμένει σε θερμοκρασία 2-8 ℃ μετά την τήξη. Προστέθηκε μια ορισμένη ποσότητα PBS (PH7.4) και το δείγμα ομογενοποιήθηκε πλήρως με το χέρι ή με ομογενοποιητή. Φυγοκεντρήστε για 20 λεπτά με ταχύτητα 2000-3000 σ.α.λ. Συλλέξτε προσεκτικά το υπερκείμενο. Χωρίστε ένα για δοκιμή και παγώστε το υπόλοιπο για αποθεματικό

6. Τα δείγματα πρέπει να εξάγονται το συντομότερο δυνατό μετά τη συλλογή. Η εκχύλιση πρέπει να πραγματοποιείται σύμφωνα με τη σχετική βιβλιογραφία και τα πειράματα πρέπει να πραγματοποιούνται το συντομότερο δυνατό μετά την εκχύλιση. Εάν η δοκιμή δεν μπορεί να πραγματοποιηθεί αμέσως, το δείγμα μπορεί να αποθηκευτεί στους -20 ℃, αλλά θα πρέπει να αποφεύγεται η επαναλαμβανόμενη κατάψυξη και απόψυξη.

7. Δεν είναι δυνατή η ανίχνευση του δείγματος που περιέχει NaN3, επειδή το NaN3 αναστέλλει τη δραστηριότητα HRP.