Ανάλυση βημάτων και θεμάτων για την προσθήκη δειγμάτων ELISA

Πρέπει να ληφθεί μέριμνα για την αποφυγή σοβαρής αιμόλυσης. Η αιμοσφαιρίνη περιέχει ομάδα αίμης, η οποία έχει τη δράση παρόμοια με τα υπεροξείδια. Επομένως, στον προσδιορισμό ELISA με το HRP ως το ένζυμο, εάν η συγκέντρωση αιμοσφαιρίνης στο δείγμα ορού είναι υψηλή, είναι εύκολο να απορροφηθεί στη στερεή φάση στη διαδικασία αναπαραγωγής, έτσι ώστε να αντιδράσει με το υπόστρωμα HRP που προστίθεται αργότερα για χρώμα ανάπτυξη. Τα δείγματα ορού που διαχωρίζονται με άσηπτη λειτουργία μπορούν να αποθηκευτούν στους 2 ~ 8 ℃ για μια εβδομάδα και συνιστάται η κατάψυξη αποθήκευσης εάν εμπλέκονται βακτήρια. Τα δείγματα πρέπει να διατηρούνται κάτω από -70 ℃ για μεγάλο χρονικό διάστημα. Η συλλογή δειγμάτων και ο διαχωρισμός του ορού θα πρέπει να προσέχουν ώστε να αποφεύγεται η βακτηριακή μόλυνση όσο το δυνατόν περισσότερο, η ανάπτυξη βακτηρίων, η έκκριση ορισμένων ενζύμων μπορεί να είναι αντιγόνα, αντισώματα και άλλες πρωτεϊνικές δράσεις αποσύνθεσης. Από την άλλη πλευρά, ορισμένα βακτηριακά ενδογενή ένζυμα, όπως η β-γαλακτοσιδάση του Escherichia coli, τα ίδια θα προκαλέσουν μη ειδική παρέμβαση στον προσδιορισμό που επισημαίνεται με το αντίστοιχο ένζυμο. Σε περίπτωση θολότητας ή κροκιδωτών που προκαλούνται από βακτηριακή μόλυνση κατά τη συντήρηση του δείγματος, το υπερκείμενο θα πρέπει να λαμβάνεται για ανίχνευση μετά από καθίζηση φυγοκέντρησης. Η κατάψυξη-απόψυξη δειγμάτων ορού πρέπει να αποφεύγεται λόγω διακοπής ρεύματος. Η μηχανική δύναμη διάτμησης που δημιουργείται από την επαναλαμβανόμενη απόψυξη του δείγματος θα καταστρέψει πρωτεΐνες και άλλα μόρια στο δείγμα, με αποτέλεσμα ψευδώς αρνητικά αποτελέσματα. Επιπλέον, πρέπει επίσης να δοθεί προσοχή στη μίξη δειγμάτων κατάψυξης-απόψυξης, και δεν πρέπει να πραγματοποιούνται βίαιες ταλαντώσεις. Η ανάμιξη πρέπει να αντιστραφεί επανειλημμένα.

Στην ELISA, υπάρχουν γενικά τρία βήματα για την προσθήκη δειγμάτων, δηλαδή, προσθήκη του συζυγούς ενζύμου, προσθήκη υποστρώματος. Μετά την τήξη του κατεψυγμένου ορού, η πρωτεΐνη συμπυκνώνεται τοπικά και κατανέμεται άνισα. Θα πρέπει να αναμιγνύεται πλήρως, απαλά και να αποφεύγονται οι φυσαλίδες. Μπορεί να αναμιχθεί ανάποδα και να μην ταλαντεύεται έντονα στο μίξερ. Η παρασκευή δειγμάτων πλάσματος απαιτεί τη βοήθεια αντιπηκτικών, ενώ τα δείγματα ορού μπορούν να ληφθούν μόνο μετά τη φυσική πήξη του ορού και τη συστολή των θρόμβων στο αίμα. Αραιωτικό μπορεί επίσης να προστεθεί στην οπή πλάκας, και στη συνέχεια προστίθεται δείγμα ορού και στη συνέχεια ανακινείται σε μικρο ταλαντωτή για 1 λεπτό για να εξασφαλιστεί η ανάμιξη. Γενικά, τα δείγματα ορού που μετρήθηκαν εντός 5 ημερών μπορούν να αποθηκευτούν στους 4 ° C και αυτά που μετρήθηκαν περισσότερο από μία εβδομάδα πρέπει να αποθηκευτούν σε κρύο πάγο. Ένα ευρύ φάσμα δειγμάτων μπορεί να χρησιμοποιηθεί για τον προσδιορισμό ELISA. Τα σωματικά υγρά (όπως ορός), οι εκκρίσεις (σάλιο) και τα εκκρίματα (όπως ούρα, κόπρανα) μπορούν όλα να χρησιμοποιηθούν ως δείγματα για τον προσδιορισμό ορισμένων συστατικών αντισωμάτων ή αντιγόνων. Το μέρος του κιτ ELISA που δεν απαιτείται σε αυτό το τεστ θα πρέπει να φυλάσσεται εγκαίρως στο ψυγείο.